植物提取物该如何评价其抗氧化活性？选择薄层色谱法更靠谱推荐

2022-11-22 | 新闻资讯 作者：小编


目前，做植物提取物检测的行业大多在化妆品、饲料添加剂、功能食品、保健品、药品等行业。抗氧化活性评价是部分植物提取物功效评价项目之一。由于部分植物提取物含有芦丁、槲皮素、花青素、茶多酚等大量抗氧化活物质，所以很多产品以这些植物提取物为原料，生产出的产品主打抗衰老、抗疲劳、抗炎等功效，正确评价该类物质的抗氧化活性就成为其质量检测的重要一环。


植物提取物


一、抗氧化活性评价方法分类

我们在对植物提取物进行抗氧化活性评价时，需要根据测试对象不同来分为体内评价和体外评价二大类。体内评价方法可以用丙二醛、超氧化物歧化酶、谷胱苷肽等作为检测指标，通过检测其含量的多少来评价其体内抗氧化活性的高低。体外抗氧化评价方法则主要以自由基清除法、氧化还原法为主。体内方法的优势是更接近人体结果，但一般费时费力，而且最主要的缺点就是只能反映某一指标活性的高低。体外方法则很好地弥补了这一缺点。其中，1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)法是应用最广泛的抗氧化测定方法。


这里必须注意的是，常规的比色皿模式的 DPPH 测定法将 DPPH 溶液与样品直接混合，因此检测得到的是样品总的抗氧化活性。然而，植物提取物原料通常是多元抗氧化活性物质混合物。当这些物质混合在一起被 DPPH 法测定的时候，相互之间可能存在抗氧化拮抗或协同的效应，导致检测评估结果偏低或者偏高。


此外，在很多评价任务中，仅仅测定混合物样品的总抗氧化性常规的抗氧化活性评价方法基于DPPH 分子与自由基混合后体系的颜色变化，利用紫外-可见分光光度计监测其吸光度值变化可以实现对样品中总抗氧化活性的定量分析。


但必须注意的是，这种抗氧化评价方法有一个固有的缺点：检测选择性差。更确切地说，当样品中含有两种或者两种以上的抗氧化活性物质的时候，分析结果无法区分每一种物质的抗氧化活性高低。而基于实验动物模型的抗氧化评价方法时间长、成本高且误差大，因此难以形成国家标准。


薄层色谱仪器


二、薄层色谱法介绍

薄层色谱法是近年来广泛应用到植物提取物分析的一项色谱分离技术。建立在薄层色谱和 DPPH 显色反应联用基础上的抗氧化分析方法兼备选择性高和通用性好的优点。更重要的是，薄层色谱是目前唯一能与生化反应直接联用的色谱工具。和传统的试管法测试不同，薄层色谱的色谱分离结果开放性和反应载体功能可以从根本上解决基于 DPPH 变色反应的抗氧化评估方法选择性差的问题。薄层分离使原本混在一起的不同抗氧化物质按分子结构的差异移动到薄层板上不同的位置形成物理隔离，因而可以有效避免各种物质之间可存在的协同或拮抗效应；随后，通过浸渍方式与薄层板耦合的 DPPH 溶液可以方便地实现对混合物中不同抗氧化组分的同时评估。因此，相对于传统的方法，建立在薄层色谱和 DPPH 显色反应基础上的抗氧化评价方法更加可靠。


三、薄层色谱法研究

目前，薄层色谱法已经发展出一整套具备完整的仪器化操作平台，在点样、展开、浸渍衍生和扫描定量过程中均实现了半自动甚至全自动化，并且显著扩展了应用范围。其中，半自动薄层点样仪在高压氮气流的协助下，点样针内的液体样品以极细的液流形式被吹扫至色谱板上，点样体积通常在 1~10 μL 范围内。通过非接触吹扫法进行条带状点样，可以显著提高分离后相邻斑点的分辨率。薄层色谱分析过程中，所有步骤独立并配备相对应设备，可同时进行操作和分析，不仅提高了工作效率，也增加了仪器选择的灵活性。仪器化的操作平台在很大程度上提高了色谱分离的灵敏度及色谱展开图的分辨率，同时可视化成像后的光密度扫描提高了结果的准确性和重现性。


四、薄层色谱标准

 目前可查询到的关于薄层色谱技术的国家标准有两项：《配合饲料中 T-2毒素的测定 薄层色谱法》和《蜂蜜中高果糖淀粉糖浆测定方法 薄层色谱法》。未查到将薄层色谱与生物传感联合用于植物提取物中功效成分活性评估的国家标准、行业标准和地方标准。这一缺失，使得企业在利用植物废弃物作为原料生产抗氧化功效产品及其质量控制缺乏技术支撑，无标准可用。


五、薄层色谱在植物提取物活性评价方面的应用

基于仪器化薄层色谱和生物传感反应的活性评价方法已经成为分析化学领域一个新的热点前沿。与柱色谱的闭环工作原理不同，薄层色谱是一个去中心化、开放的分析系统，分离过程结束后分离结果被保留在色谱板上而非废液瓶中。这一独特的优势使得薄层色谱的分离结果可以方便地与很多无法与传统柱色谱系统兼容的检测手段实现无障碍融合。因此，薄层色谱不仅是一种通量大、操作简便和灵活性高的色谱工具，而且还可以作为多种离线检测方法高效集成融合的分析平台，在分析通量、简便性、精密度和适用范围等方面达到了较为理想的平衡，因此在植物提取物活性评价方面有良好的应用前景。


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